魚ELISA試劑盒樣品采集及血清分離中要注意避免細菌污染

魚ELISA試劑盒樣品收集和保存：
用于ELISA測定常用的臨床標本是血清（漿）。要注意避免嚴重溶血，因為血紅蛋白中含有具有類似過氧化物活性的血紅素基團，在孵育時很容易吸附于固相，與HRP底物反應產生假陽性。
魚ELISA試劑盒樣品采集及血清分離中要注意避免細菌污染，一方面細菌分泌的酶可能對抗原抗體等蛋白產生分解作用，另一方面，細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶會對相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。
魚ELISA試劑盒樣品應該要避免反復凍融。因反復凍融所產生的機械剪切力對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。另外，樣品混勻時，不要劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。
一般而言，如果在收集樣品的當天進行檢測，可將樣品及時儲存在4℃備用；而對隔天再檢測的樣本，應及時分裝后凍存在-20℃備用，若要長期保存樣品，好將其置于-70℃凍存。
實驗具體步驟：
1、魚ELISA試劑盒試劑準備
在實驗開始前，需將試劑盒從冰箱中拿出來在室溫放置20min，再進行測定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡，也可使溫育時反應孔內的溫度能較快的達到所要求的高度，以滿足測定要求。
其次，目前商品中ELISA試劑盒中的洗板液均需在實驗過程中對其所提供的濃縮液進行稀釋配制，因此稀釋時所用的蒸餾水或去離子水應該保證質量。此外，底物反應液應該反應顯色前進行現配現用。同時，為了保證實驗的均一性，實驗中所有試劑在加樣前必須搖勻。
2、魚ELISA試劑盒加樣
因ELISA的靈敏度較高，則應該按規定將血清稀釋至適當的倍數，以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。
加樣品時，單孔用量要求：≥20ul/指標，如需要做2個復孔則血量≥60ul/指標。如果用量充足，好提供50ul/孔/指標。具體用量也需根據試劑盒的要求而定。
吸取樣品時，加樣槍頭不應粘附多余的液體；加樣時不可90度向孔中滴加液體，否則會導致液體殘留在吸頭上，加樣不準確。正確加樣方法應為45度，吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入。
加樣時速度不可過快，否則無法保證微量加樣的準確性和均一性；要避免樣品加在孔壁上部而產生非特異性吸附。不可將樣品濺出以避免對鄰近孔產生污染。